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Electrophorèse et western blot
Objectifs
Programme
Comprendre les principes de migration éléctrophorétique, de transfert et de révélation des protéines. Maitriser les différents paramètres. Mettre en œuvre des éléctrophorèses et western blot.
Influence des paramètres physicochimiques (température, pH, charge, force ionique, agents dénaturants, ...) sur la structure et les propriétés des protéines Electrophorèses : principe, les différents types, les paramètres de migration – Conditions natives, dénaturantes et réductrices
– Les transferts : principe, les différents types, les paramètres de transfert et les différents supports echniques de révélation des protéines sur gel d’électrophorèse (analyse comparative et limite de détection)
Techniques de révélation sur les membranes de western blot
(analyse comparative et limite de détection) Les différentes étapes de validation expérimentale
– SDS-PAGE (de la préparation des gels à la révélation colorimétrique)
– Western Blot (transfert, coloration au rouge Ponceau et immunodétection)
Public visé
Ingénieurs, techniciens, doctorants, chercheurs souhaitant comprendre, approfondir et acquérir les techniques d’électrophorèses et de western blot.
Prérequis
Aucun
Méthodes pédagogiques
Cours théorique, travaux pratiques et travaux dirigés
Modalités d'évaluation
Evaluation orale, Travaux pratiques, étude de cas
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