Expression, purification et caractérisation de protéines recombinantes

- Comprendre le principe de la production de protéines recombinantes et acquérir des notions sur la stabilité des protéines.

- Connaître les étapes techniques de la production de protéines recombinantes et les mettre en œuvre expérimentalement.

- Le principe de production des protéines recombinantes : les différentes stratégies et les outils. Principe et conséquence de la surexpression d’un gène

– Les méthodes d’extraction et d’enrichissement des protéines recombinantes

– Les stratégies de purification (chromatographique ou autres)

– Les techniques de caractérisation des protéines recombinantes : biochimiques, biophysiques et fonctionnelles

– Préparation de bactéries compétentes

– Transformation des bactéries avec un vecteur d’expression contenant le cDNA d’une protéine d’intérêt

– Sélection et validation des clones (PCR on colony ou autre)

– Culture bactérienne et induction de l’expression de la protéine d’intérêt

– Extraction protéique et purification de la protéine d’intérêt par chromatographie

– Dosage et analyse de la purification par gel SDS-PAGE

– Evaluation de la qualité et de l’efficacité de la purification

– Caractérisation de la fonction et de la stabilité de la protéine purifiée