Validation pratique de votre système CRISPR/Cas9

Acquérir une une procédure complète de validation de son

système CRISPR-Cas avant de passer sur son système cellulaire

– Etre capable de réaliser une transcription in vitro. Etre autonome

pour réaliser des purifications d'ADN et d'ARN et choisir ses

propres "outils"de genome editing

– Stratégie de clonage des guides

– Le choix des vecteurs d’expressions du sytème CRISPR/cas9,

(eucaryote animal , végétal, procaryote)

– Modulation d’expression d’un système cellulaire par

CRISPR cas13

– Les sytèmes CRISPRi, CRISPRa

Objet de l’expérimentation sur la journée : validation de vos

guide sgRNA

– Amplification par PCR d’un gène cible

– Contrôle et purification de l’amplicon

– Transcription in vitro du guide et purification du guide

– Choix de la Cas9

– Assemblage In Vitro du guide et de la Cas9

– Hydrolyse in vitro de la cible amplifiée par PCR par le

Système CRISPR/cas9

– Contrôle du produit d’hydrolyse par électrophorèse

– Conclusions sur la validation du système