Genome editing : CRISPR/Cas9

– Présenter les stratégies de «Genome editing» par le système

CRISPR/Cas9

– Exploiter et appliquer un protocole d'editing qui présente les

aspects sensibles et stratégiques de l'utilisation du système

CRISPR/Cas9

– Etre capable de modéliser et choisir des guides, de structurer

un protocole d'édition génomique et d'orienter la stratégie de

genome editing sur sa thématique de recherche, qu'elle soit

fondamentale ou appliquée

ENSEIGNEMENTS

– Généralités - Historique

– Notions fondamentales

– Genome editing : la modification précise des génomes

– L’anatomie fine de CRISPR/Cas9

– Les exigences de PAM en plus de SpCas9

– CPF1: un homologue de Cas9

– Amélioration du ciblage et de la spécificité de CRISPR

avec eSpCas9 et SpCas9-HF1

– Les brevets de CRISPR et la propriété

TRAVAUX DIRIGÉS

– Les avantages de CRISPR par rapport aux autres systèmes

de modification des génomes,

– Comment utiliser CRISPR dans vos expériences

– Comment planifier ses expérimentations

– Quel type de Cas9 choisir

– Création de mutations

– Le design du gRNA

– Les outils en lignes :

– Choix de séquences sgRNA pour knockouts/knockins

– Le choix d’oligonucléotides pour plasmides Cas9

– Plasmides d’activations CRISPR/Cas9

– Approche pratique réalisée au travers d’études de cas

et de stratégies spécifiques

– Applications en recherche fondamentale et recherche appliquée :

ciblage de gènes, de protéines, répression, activation, gene

screening