Initiation théorique et pratique à la technique PCR

Comprendre le principe de la réaction de polymérisation en chaîne (PCR) et savoir la mettre en oeuvre dans son laboratoire.

ENSEIGNEMENTS

L’état des connaissances aujourd’hui

– Rappels sur l’organisation des êtres vivants et la structure des génomes (notions de gène, génotype, phénotype, ADN, ARN, protéine)

Focus sur la technique de PCR (Réaction de Polymérisation en Chaîne)

– Principe de l’amplification d’ADN par PCR

TRAVAUX DIRIGÉS

– Amorces et PCR : règles et stratégies de choix des amorces

PCR (utilisation d’outils bioinformatiques)

– Optimisations des conditions d’une PCR : température, concentrations, gestes techniques, risque de contamination, qualité et quantité initiale d’ADN, notion de gènes de ménage

PARTIE PRATIQUE - TP

– Application de la PCR à la recherche de polymorphismes (Génotypage) : notions de marqueurs moléculaires (microsatellites, SNP, RAPD ...)

Ateliers pratiques

– Extraction d’ADN génomique à partir de différentes sources cellulaires et contrôle de la qualité des ADN extraits

– Identification d’une espèce d’origine bactérienne, végétale ou animale par la technique de PCR (extraction d’ADN, MixPCR, contrôle)

– Analyse des résultats par électrophorèse sur gel d’agarose

Travaux dirigés

– Présentation des banques de données en ligne

– Analyse de séquences d’ADN par différents logiciels pour le design d’amorces

– Optimisation de conditions de PCR